尊龙凯时大鼠肺泡上皮细胞L2培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡上皮细胞L2

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：初次建议1:2传代，传代后每2天更换培养液

备注：收集培养基用无菌离心管进行保存，以供后续对比。如果对比培养效果不佳，建议直接选择尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理

收到细胞后，待其培养至良好状态后，应灌满完全培养液并封好瓶口。这是运输细胞的最佳方法。处理前，请使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续操作。使用显微镜观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（最好各拍摄40x、100x及200x倍），前三天的照片将作为重要的售后依据，否则默认收到的状态良好。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代：

若细胞汇合度未超过80%，请将瓶内的完全培养液收集至离心管中，保留5ml培养基后放入37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞变化，若细胞大部分已变圆并脱落，快速拿回操作台，轻轻敲打培养瓶后添加至少5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以确保完全脱落后吸出细胞悬液，转移至15ml离心管中，在1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例将细胞悬液分瓶传代（使用两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中进行培养。

b、细胞冻存：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，再将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀的细胞加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如果后续需要转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放超过24小时后再进行转移。

c、细胞复苏：

1. 从液氮中取出细胞冻存管（务必佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，然后使用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃上清，加入5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱进行培养。
4. 次日更换为新鲜的完全培养基进行继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能会发生脱落，属正常现象。可以采用以下方法处理：将培养瓶中所有培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养。沉淀后的细胞加入胰酶1-2ml，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟后，用5ml完全培养基终止反应。再次离心并弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱继续培养。

五、售后条款

1. 细胞出现问题后，可重发的情况包括：
   • 运输过程中遭遇的各种问题，如细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液。
   • 细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后予以重发。
   • 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存的细胞复苏后24小时内，若大部分细胞未存活，需提供真实细胞状态照片，核实后送货。
2. 细胞出现问题后，不予重发的情况包括：
   • 客户操作不当导致的细胞污染。
   • 客户未按照推荐方法进行细胞培养的。
   • 在收到后的2天内未告知细胞状态的问题。

以上信息由尊龙凯时提供。感谢您选择尊龙凯时的产品与服务！