尊龙凯时人胃癌细胞MGC803培养指导

一、细胞培养条件

细胞名称：人胃癌细胞MGC803

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640 + 10% FBS + 1% P

传代方法：第一次建议1:2传代，传代情况每两天更换培养基。

备注：收集培养基时请使用无菌离心管，进行过渡对比培养。如果对比培养效果不佳，建议直接选购我们的完全培养基。

二、细胞处理及培养策略

收到细胞后，建议将其培养至良好状态，然后用完全培养液灌满细胞瓶并封好瓶口，以确保运输细胞的最佳状态。收到细胞后，请使用75%酒精喷洒整个细胞瓶以消毒，随后在超净工作台进行无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。在显微镜下观察细胞生长情况，并进行不同倍数的拍照保存（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据。如果没有提供照片，默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请将完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基并置于37℃、5% CO2的孵箱中培养；若细胞密度超80%，可进行传代培养，步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。若细胞大部分变圆且脱落，迅速将其移回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖T25培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞变圆后加入5ml完全培养基以终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，然后转移悬液至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后倒入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如果后续需要转移至液氮罐，需先在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其放入37℃水浴中解冻，直到冻存管中无结晶后，使用75%的酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，并放于37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基进行继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能因贴壁不牢而出现脱落，这属于正常现象。如脱落较多，可以将培养瓶内的所有培养液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，并将上清液用于过渡培养。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打并重悬，然后进行1-2分钟的消化，并通过5ml完全培养基终止反应。再次离心、弃去上清后加入1-2ml完全培养基重悬，按照1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶后，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1) 细胞出现问题的重发情况

1. 细胞在运输途中遭遇问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，均可申请重发。
2. 如有细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后将重发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏24小时后，如果大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可申请重发。
4. 干冰发货细胞复苏后24小时内或常温发货细胞静置4小时未开封出现污染的，均可重发。
5. 如细胞活性出现问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，并使用台盼蓝染色法检测细胞活力，核实后将重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天请拍照，如未在3天内告知，则视为产品合格。4-7天内，如有问题需提供前3天照片及操作细节，技术人员判定为我方责任的则重发，若判定为双方责任则协商处理或按合同价收取50%重发费用。

2) 不予重发的情况

1. 客户造成的细胞污染，不予重发。
2. 客户操作不当导致细胞状态不佳，不予重发。
3. 非本库推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不佳，不予重发。
4. 若细胞状态不佳，未提供细胞培养前3天照片的，不予重发。
5. 细胞培养过程中经其他处理的，不予重发。
6. 如收到细胞后2天内未通知的，将不予重发。
7. 其他情况将根据具体情况处理。