尊龙凯时哺乳动物蛋白提取试剂盒是进行高效蛋白提取的重要工具。该试剂盒包括以下成分：5X Buffer（10ml）、5X NaCl（10ml）、5X SDS（10ml）、5X DOC（10ml）、5X NP-40（10ml）、20X PBS（10ml）以及Protease inhibitor cocktail（0.5ml）。该试剂盒可在常温下保存，唯独Protease inhibitor cocktail需要储存于-20°C，保持有效期为24个月。

提取步骤

1. 准备工作

根据5X Buffer、5X NaCl、5X SDS、5X DOC和5X NP-40的比例（1:1:1:1:1，v/v）配置细胞裂解缓冲液。每1ml细胞裂解缓冲液适合提取106~107个细胞或5~20mg的组织。在使用前，需加入10μl的Protease inhibitor cocktail以保护蛋白质。

2. 清洗细胞或组织

a. 对于贴壁细胞：去除细胞培养基后，用PBS缓冲液冲洗细胞两次，然后加入细胞裂解缓冲液（106~107个cells/ml）。将细胞置于冰袋中，摇床孵育30分钟，期间多次重悬细胞，最后收集裂解液。

b. 对于悬浮细胞：在700xg下离心5分钟，弃去上清液。用PBS重悬洗涤细胞两次，随后在4°C下离心并去除上清。将沉淀重悬于细胞裂解缓冲液中（106~107个cells/ml），再在冰袋中摇床孵育30分钟。

c. 对于组织：将组织切割成小块，用PBS冲洗两次。加入细胞裂解缓冲液（5~20mg组织/ml），将样品转移至预冷微量匀浆器中，在冰上均匀化组织30~50次。均质过程对于目标蛋白功能的完整性极为关键。

3. 离心分离

在34°C下，进行12,000xg离心10分钟以沉淀细胞碎片，或者使用高速离心在100,000xg下进行45分钟以制备高纯度的蛋白质溶液。

4. 保存蛋白质上清液

将含有蛋白质的上清液转移至冷冻管中。在冰上可立即使用，或将其保存于-70°C，用于后续实验。通过使用尊龙凯时的蛋白提取试剂盒，您将获得高质量的蛋白质样品，确保实验结果的可靠性与准确性。