病毒载体因其高效递送CRISPR组分的优势，已成为基因治疗研究中的关键工具，尤其适用于转染难度较高的分化细胞。不同类型的病毒可以实现高效的体内递送，然而复杂的生产工艺和高成本限制了其广泛应用。与质粒相比，病毒载体的生产流程更为繁琐：首先需要将CRISPR组分克隆至转移载体，然后再包装成病毒颗粒，这种劳动密集型的特性使得规模化生产面临挑战。目前主流的CRISPR递送载体包括慢病毒、腺相关病毒（AAV）和腺病毒，它们在转导效率、免疫原性及载体容量等方面各具特色，需根据实验目标选择合适的类型。

基于慢病毒的递送方式

慢病毒因其与电穿孔相当的基因递送效率，成为CRISPR组分递送的热门工具，尤其适合大规模的CRISPR文库筛选。慢病毒的主要优势在于能够将转基因整合入宿主基因组，实现长期表达，这对于过表达实验具有重要价值。然而，其基因组整合所带来的插入突变风险限制了在临床中的应用，目前主要用于基础研究及体外基因修饰，例如FDA已批准的CAR-T癌症疗法及治疗β-地中海贫血症的Zynteglo。需要注意的是，慢病毒递送CRISPR时，Cas9的持续表达可能引发脱靶效应，而可诱导表达系统或整合酶缺陷型慢病毒（IDLV）可以有效解决这一问题，其IDLV将基因组整合率降低了约500倍。尽管其转导效率低于常规慢病毒，但在体外和体内神经元中的递送效率与常规载体相当，展现了在中枢神经系统疾病治疗中的独特潜力。

基于AAV的递送方式

AAV递送系统当前面临两大技术瓶颈：首先是载体容量限制（约42kb），远低于慢病毒的装载能力；其次是转导效率相对较低。针对容量问题，研究人员提出了多重解决方案：①采用序列较小的SaCas9；②双载体共递送策略（分别装载Cas9与gRNA）；③SpCas9分割表达技术，通过两个载体递送SpCas9片段在细胞内形成完整的SpCas蛋白。值得注意的是，AAV系统在临床应用中具有独特优势：血清型的多样化选择可以实现组织特异性靶向，结合衣壳定向进化技术（通过体外/体内筛选优化衣壳蛋白），可进一步提升递送的精准度和治疗效果。目前尚无基于AAV的CRISPR疗法获得FDA批准，但AAV平台已成功应用于其他基因治疗，例如治疗脊髓性肌萎缩的Zolgensma®，其商业化应用为CRISPR-AAV疗法的临床转化提供了重要参考。

基于腺病毒的递送方式

腺病毒的基因递送系统在安全性方面表现突出，其非整合特性已通过多项临床试验验证，成为替代慢病毒的重要选择。与AAV和慢病毒载体相比，腺病毒具备显著的载体容量扩增能力，但高免疫原性可能干扰基因编辑效果。目前，临床应用最广泛的Ad5血清型依赖于CAR受体介导细胞转导，这限制了其组织适用性。最近研发的Ad5/F35嵌合体成功突破了CAR受体的依赖性，同时gutless腺病毒载体（仅保留必要的包装序列）不仅降低了免疫原性，同时也扩大了载体容量（可达33kb），非常适合表达长的或多个转基因。在临床转化方面，腺病毒载体已表现出多重突破：①在遗传病领域，EBT-101作为首个静脉注射型CRISPR-HIV治疗载体，已启动I/IIa期临床试验；②在肿瘤治疗方面，多项临床前研究证实其在靶向实体瘤时的优势。值得一提的是，虽然FDA已批准首款腺病毒基因疗法，但基于CRISPR的腺病毒疗法仍在临床实验阶段。

总之，在基因治疗的快速发展过程中，病毒载体的多样性及其各自的优势为治疗方案提供了多种可能性。特别是在许多前沿技术的推动下，品牌尊龙凯时正在致力于推动基因治疗与CRISPR技术相结合的临床应用，相信未来将为患者带来更好的治疗选择。