尊龙凯时大鼠肝星形细胞（THSC）培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肝星形细胞THSC

生长特性：无血清冻存液

培养体系：DMEM

传代方法：第一次建议1:2传代

传代情况：2天换液

备注：使用无菌离心管收集培养基，作为对比培养的样本。若对比培养效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理及培养

收到细胞后，待细胞处于良好状态时灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。首先使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放于超净台中进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行后续处理。在显微镜下观察细胞生长情况，并拍照保存（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片则默认收到状态良好。传代后建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基进行对比培养，并在换液后将瓶盖略微松开。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，留下5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱培养。如果细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，迅速在操作台轻敲培养瓶后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清液，并补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打以使细胞脱落，将悬液转移至15ml离心管中并在1000 RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护设备），迅速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞在运输过程中可能出现脱落，这是正常现象。如脱落较多，可将培养瓶中的培养液收集至离心管中，进行1000 RPM离心5分钟，收集上清作为对比培养样本。沉淀后添加1-2ml胰酶轻轻吹打，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，再离心并弃去上清，重新重悬。然后按1:2的比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题的情况下可以重发的情况包括：

1. 在运输过程中遭遇的问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，均可重发；
2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发；
3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏24小时后，如果大多数细胞未存活，需提供细胞状态照片，符合条件可重发；
4. 干冰发货的细胞若在复苏后24小时未开封，出现污染，亦可重发；
5. 细胞活性问题请在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发；
6. 在收到细胞当天及第2、3天内拍照，若未告知视为产品合格。若在4-7天内出现问题并提供收到细胞前3天及出现问题时照片的，一并与技术人员沟通后，责任判定将由技术人员确定再重发。

2）细胞出现问题但不予重发的情况包括：

1. 客户造成的细胞污染不予重发；
2. 客户不正确操作导致的细胞状态不良；
3. 使用非本库推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不良；
4. 细胞状态不佳且未提供细胞培养前3天的照片；
5. 在细胞培养时经过其他处理的情况；
6. 细胞收到后2天内未告知的；
7. 视具体情况而定。